酶聯(lián)免疫的原則

酶聯(lián)免疫其具有特異、靈敏、簡便、快速的特點，現(xiàn)已在生物醫(yī)學研究領(lǐng)域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應用。

EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等]作標記物的，因此，EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的，不外乎三種可能的方式：①增加標記酶的量；②非顯色底物的應用；③附加一個受標記酶催化的反應系統(tǒng)。

一、增加標記酶的量

通過生物素/親合素—酶或酶/抗酶復合物的間接方法，可以增加ELISA測定中*后所測定的標記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性，但同時有增加非特異的背景顯色的可能。

二、非顯色底物的應用

從酶的反應底物著手，使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發(fā)光物，從而提高EIA的測定敏感性，這種方法的優(yōu)點是不需額外的步驟及試劑制備，缺點是需要特殊的測定儀器。

三、附加一個受標記酶催化的反應系統(tǒng)

原始標記酶催化附加一個反應系統(tǒng)，如酶底物反應循環(huán)或酶級聯(lián)反應，從而達到反應放大的目的。這種由數(shù)個催化反應的耦聯(lián)而構(gòu)建的放大系統(tǒng)，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高來源于真正的信號放大，而不是簡單地將一個分子轉(zhuǎn)變?yōu)楦嗟囊子跍y定的分子。一個適用的酶放大系統(tǒng)的選擇除了要考慮生化因素外，重要的是酶及其底物的穩(wěn)定性，并要易于獲得，因其對試驗的準確性和重復性有較大的影響。

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